濕熱滅菌工藝的滅菌溫度和時(shí)間通常會(huì)對(duì)微生物，尤其耐受性較大的微生物的殺滅效果產(chǎn)生影響。過度殺滅法假設(shè)的微生物負(fù)荷和耐受性都高于實(shí)際情況，理論上能完全殺滅微生物，足以滿足無菌保證水平的要求，故沒有必要對(duì)每一批次產(chǎn)品進(jìn)行滅菌前微生物污染水平的監(jiān)控。從控制熱原的角度，建議按照藥品 GMP滅菌器驗(yàn)證管理，以適當(dāng)?shù)念l次對(duì)微生物污染水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

      與過度殺滅法相比，殘存概率法的熱能較低，為不降低產(chǎn)品的無菌保證水平，除了需要對(duì)滅菌過程本身進(jìn)行嚴(yán)格的控制以外，還需要通過合理的工藝設(shè)計(jì)來降低微生物污染，并采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)微生物污染水平和耐受性進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
 
1. 降低滅菌前微生物污染的工藝設(shè)計(jì)
       在生產(chǎn)工藝各環(huán)節(jié)引入微生物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估基礎(chǔ)上，通常考慮采用藥液過濾、藥液存放時(shí)限控制等方法來降低注射劑滅菌前的微生物污染。雖然藥液過濾在最終滅菌產(chǎn)品的生產(chǎn)中僅僅作為輔助的控制手段，但是在工藝研究過程中，也應(yīng)該對(duì)濾膜的孔徑、材質(zhì)、使用周期等基本性質(zhì)進(jìn)行必要的篩選和驗(yàn)證，并在工藝操作中進(jìn)行相應(yīng)的規(guī)定。藥液在制備、分裝過程中易引起微生物繁殖，尤其一些營養(yǎng)型的注射劑，因此應(yīng)通過必要的考察和驗(yàn)證來確定藥液配制至過濾前、以及過濾、灌裝后至滅菌前能夠放置的最長時(shí)限，并相應(yīng)確定產(chǎn)品的批量和生產(chǎn)周期。
 
2. 滅菌前微生物污染的監(jiān)測(cè)
      滅菌前微生物污染水平監(jiān)測(cè)的取樣應(yīng)覆蓋正常生產(chǎn)的整個(gè)過程，應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估選取最有代表性的樣品，且要充分考慮到產(chǎn)品從灌裝到滅菌前的放置時(shí)間。如果灌裝需要持續(xù)一段時(shí)間，通常從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)束時(shí)分別取樣，也可根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果選取合適的取樣點(diǎn)進(jìn)行取樣。滅菌前微生物污染水平的監(jiān)測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，具體操作可參照《中國藥典》2020 年版四部通則1105“微生物計(jì)數(shù)法”和 1106“控制菌檢查法”。
 
       對(duì)于殘存概率法滅菌前微生物污染水平監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)有污染菌的產(chǎn)品，應(yīng)采用合適的方法進(jìn)行污染菌的耐受性檢查。一般來說，生物指示劑的耐受性用 DT 值（耐熱參數(shù)）來表示。耐受性檢查中任何幸存下來或生長的微生物都可以被假定為耐熱菌，一般采用定時(shí)煮沸法將其與已知的生物指示劑的耐受性加以比較，必要時(shí)，可進(jìn)一步測(cè)試耐熱污染菌的 DT 值，DT 值的測(cè)定可以參考《中國藥典》2020  年版四部通則9208“生物指示劑耐受性檢查法指導(dǎo)原則”進(jìn)行，然后根據(jù)滅菌的 F0值、污染菌的數(shù)量與耐受性對(duì)產(chǎn)品的無菌性做出評(píng)價(jià)。當(dāng)產(chǎn)品微生物污染水平超過限度時(shí)，應(yīng)對(duì)污染菌進(jìn)行鑒別，調(diào)查污染菌的來源并采用相應(yīng)的糾正措施。