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PCR實驗室污染怎么辦?

返回列表 來源: 發布日期: 2020.04.23

 在生物實驗室里,污染總是來的防不勝防,悄無聲息,假陽性結果讓無數實驗室人員抓狂和崩潰。如何避免實驗室污染是頭等大事。生物實驗大多數是微觀的,基于細胞,分子,蛋白水平。而這些微觀樣本對外界環境的影響敏感,環境中的“雜質”亂入,如樣本污染、試劑儀器交叉污染、產物氣溶膠污染等,會對實驗結果帶來負面影響。

PCR實驗室污染怎么辦?
       首先,我們要了解常見污染源有哪些?
       ? 樣本交叉污染? 試劑儀器交叉污染? 克隆質粒污染? PCR擴增產物污染? 氣溶膠污染。
                                                    五步走防止污染
 (一)合理的實驗室分區
       實驗室內各工作區的實驗用品,包括移液器等應專用。如有可能,應在裝有紫外燈的層流式工作臺(如生物安全柜、超凈工作臺)內,吸加PCR試劑,工作臺內應放置PCR專業用的微量離心機、一次性手套、各量程的移液器和其他必須物品。
 (二)正確的實驗操作
       吸加PCR試劑和模板的操作應嚴格按要求進行,吸樣要慢,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或產生氣溶膠污染。實驗的過程中應勤換手套,在進出不同區域或進行模板操作后,都應及時更換手套。
        裝有PCR試劑的微量離心管在打開之前應先做瞬時離心(約10s),將管壁及管蓋上的液體甩至管底部,從而減少污染手套或加樣器的機會。開管動作要輕,以防管內液體濺出或形成氣溶膠,造成污染。
          在同時進行多個PCR反應時, 應制備主反應混合液,再分裝至PCR反應管,zui后添加樣品核酸模板,以減少單個添加操作繁瑣造成的污染。
  () 實驗器具和試劑
          實驗室自己配置的試劑,如去離子水、緩沖液等,在使用之前均應高壓滅菌或過濾除菌。
          分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應 小量分裝,以減 少重復取樣次數,并置于-20℃保存,適當時,最好做到專人專用 。另外,PCR試劑、PCR反應液應與樣品及PCR產物分開保存,不應放于同一冰盒或冰箱。
          所有吸頭、反應管等應一次性使用,使用之前,都應經過高壓處理。若條件允許,最好使用帶濾器的槍頭。

    各工作區內的移液器要有標識,應固定使用用途,不能交叉使用。
(四 ) 實驗設計
        驗設計方面應遵循實驗室內部 質量控制的相關規定,實驗中至少應:
          設置目標DNA陽性對照反應。對靶序列所作的適當的稀釋工作應于實驗前在實驗室內別的位置進行,這樣可防止將靶DNA的濃 溶液帶到實驗室中專門進行PCR的位置。
          設置PCR試劑陰性對照和目標DNA陰性對照反應。
        實驗室的合理設計與建設是順利進行PCR實驗的基礎和保障,不合理的規劃設計給后期實驗的進行帶來很多麻煩,從源頭杜絕實驗的麻煩,需要進行專業的學習。熙邁檢測提醒大家,PCR實驗室檢測是要有資質第三方檢測公司檢測,并且提供合格的檢測報告,這樣的實驗室才能起到保護操作人員,樣品的作用!



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