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上海熙邁對生物安全檢測結(jié)果負責(zé)

PCR實驗室污染怎么辦?

返回列表 來源: 發(fā)布日期: 2020.04.23

 在生物實驗室里,污染總是來的防不勝防,悄無聲息,假陽性結(jié)果讓無數(shù)實驗室人員抓狂和崩潰。如何避免實驗室污染是頭等大事。生物實驗大多數(shù)是微觀的,基于細胞,分子,蛋白水平。而這些微觀樣本對外界環(huán)境的影響敏感,環(huán)境中的“雜質(zhì)”亂入,如樣本污染、試劑儀器交叉污染、產(chǎn)物氣溶膠污染等,會對實驗結(jié)果帶來負面影響。

PCR實驗室污染怎么辦?
       首先,我們要了解常見污染源有哪些?
       ? 樣本交叉污染? 試劑儀器交叉污染? 克隆質(zhì)粒污染? PCR擴增產(chǎn)物污染? 氣溶膠污染。
                                                    五步走防止污染
 (一)合理的實驗室分區(qū)
       實驗室內(nèi)各工作區(qū)的實驗用品,包括移液器等應(yīng)專用。如有可能,應(yīng)在裝有紫外燈的層流式工作臺(如生物安全柜、超凈工作臺)內(nèi),吸加PCR試劑,工作臺內(nèi)應(yīng)放置PCR專業(yè)用的微量離心機、一次性手套、各量程的移液器和其他必須物品。
 (二)正確的實驗操作
       吸加PCR試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按要求進行,吸樣要慢,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。實驗的過程中應(yīng)勤換手套,在進出不同區(qū)域或進行模板操作后,都應(yīng)及時更換手套。
        裝有PCR試劑的微量離心管在打開之前應(yīng)先做瞬時離心(約10s),將管壁及管蓋上的液體甩至管底部,從而減少污染手套或加樣器的機會。開管動作要輕,以防管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠,造成污染。
          在同時進行多個PCR反應(yīng)時, 應(yīng)制備主反應(yīng)混合液,再分裝至PCR反應(yīng)管,zui后添加樣品核酸模板,以減少單個添加操作繁瑣造成的污染。
  () 實驗器具和試劑
          實驗室自己配置的試劑,如去離子水、緩沖液等,在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或過濾除菌。
          分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應(yīng) 小量分裝,以減 少重復(fù)取樣次數(shù),并置于-20℃保存,適當(dāng)時,最好做到專人專用 。另外,PCR試劑、PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存,不應(yīng)放于同一冰盒或冰箱。
          所有吸頭、反應(yīng)管等應(yīng)一次性使用,使用之前,都應(yīng)經(jīng)過高壓處理。若條件允許,最好使用帶濾器的槍頭。

    各工作區(qū)內(nèi)的移液器要有標(biāo)識,應(yīng)固定使用用途,不能交叉使用。
(四 ) 實驗設(shè)計
        驗設(shè)計方面應(yīng)遵循實驗室內(nèi)部 質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定,實驗中至少應(yīng):
          設(shè)置目標(biāo)DNA陽性對照反應(yīng)。對靶序列所作的適當(dāng)?shù)南♂尮ぷ鲬?yīng)于實驗前在實驗室內(nèi)別的位置進行,這樣可防止將靶DNA的濃 溶液帶到實驗室中專門進行PCR的位置。
          設(shè)置PCR試劑陰性對照和目標(biāo)DNA陰性對照反應(yīng)。
        實驗室的合理設(shè)計與建設(shè)是順利進行PCR實驗的基礎(chǔ)和保障,不合理的規(guī)劃設(shè)計給后期實驗的進行帶來很多麻煩,從源頭杜絕實驗的麻煩,需要進行專業(yè)的學(xué)習(xí)。熙邁檢測提醒大家,PCR實驗室檢測是要有資質(zhì)第三方檢測公司檢測,并且提供合格的檢測報告,這樣的實驗室才能起到保護操作人員,樣品的作用!



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